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内细胞的培养
点击次数:825 发布时间:2015-07-17
 



 1. 瘤细胞悬液接种
(1)无菌选取生长良好瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。    
(2)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨,经80~100目筛网过滤成细胞悬液。
(3)培养细胞应用PBS洗两遍。
(4)计数并调整细胞浓度至107~108/ml。
(5)常规消毒后,于接种部位用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液。初次接种成功率低,细胞数尽可能多一些。
(6)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期,以后随着传代潜伏期逐渐缩短,最后固定为一个相对稳定的时间。
2. 腹水瘤的建立与腹水瘤的接种 
将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤细胞,将这种腹水反复传代,即可成为腹水瘤。初次传代时,腹水常呈血性,反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。
(1)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤,进行 细胞计数 。
(2)消毒动物,左下腹穿刺接种106腹水瘤细胞。
(3)接种腹水瘤细胞后约7~12d,待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9号针头抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。
(4)抽取的腹水经3000rpm离心15min,收集上清,分装冻存备用。

 
 
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